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食用菌滅菌鍋爐液氮冷凍保藏法

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食用菌滅菌鍋爐液氮冷凍保藏法

發布日期:2017-11-22 00:00 來源:http://escortluton.com 點擊:

(1)預備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管,食用菌滅菌鍋爐凤凰彩票网要求能耐受溫度突然改變而不致決裂,因而,需求選用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管,安瓿管的巨細一般運用75×10mm的,或能容1.2mm液體的。

凤凰彩票网(2)加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或霉菌孢子等簡略分散的細胞時,則將空安瓿管塞上棉塞,1.05kg/cm2,121.3℃滅菌15分鐘:若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內預先參加保護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液,參加量以能浸沒今后參加的菌落圓塊為限,然后再用1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌15分鐘。

凤凰彩票网(3)接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液,裝入已滅菌的安瓿管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器,從平板內切取菌落圓塊,放入含有保護劑的安瓿管內,然后用火焰熔封。浸入水中查看有無縫隙。

(4)凍住再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍住至-30℃。若細胞急劇冷凍,則在細胞內會構成冰的結晶,因而下降存活率。

凤凰彩票网(5)保藏經凍住至-30℃的安瓿管當即放入液氮冷凍保藏器(圖Ⅶ-14)的小圓筒內,然后再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃,液態氮內為-196℃。

(6)恢復培育保藏的菌種需求用時,將安瓿管取出,當即放入38—40℃的水浴中進行急劇凍住,直到悉數消融停止。再打開安瓿管,將內容物移入適合的培育基上培育。

此法除適合于一般微生物的保藏外,對一些用冷凍枯燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以構成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長時刻保藏,并且性狀不變異。缺陷是需求特別設備。

食用菌滅菌鍋爐

冷凍枯燥保藏法

(1)預備安瓿管用于冷凍枯燥菌種保藏的安瓿管宜選用中性玻璃制造,形狀可用長頸球形底的,亦稱淚滴型安瓿管(圖Ⅶ-15),巨細要求外徑6—7.5mm,長105mm,球部直徑9—11mm,壁厚0.6—1.2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞,1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘,備用。

凤凰彩票网(2)預備菌種,用冷凍枯燥法保藏的菌種,其保藏期可達數年至十數年,為了在許多年后不出過失,故所用菌種要特別留意其純度,即不能有雜菌污染,然后在最適培育基中用最適溫度培育,使培育出杰出的培育物。細菌和酵母的菌齡要求超越對數成長時刻,若用對數成長時刻的菌種進行保藏,其存活率反而下降。一般,細菌要求24—48小時的培育物;酵母需培育3天;構成孢子的微生物則宜保存孢子;放線菌與絲狀真菌則培育7—10天。

(3)制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例,用脫脂牛乳2ml左右參加斜面試管中,制成濃菌液,每支安瓿管分裝0.2ml。

(4)冷凍冷凍枯燥器有成套的設備出售,價值貴重,此處介紹的是簡易辦法與設備,可到達相同的意圖。

凤凰彩票网將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍,無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精液或干冰丙酮液,溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑,只需冷凍4—5分鐘,即可使懸液結冰。

凤凰彩票网(5)真空枯燥為在真空枯燥時使樣品堅持凍住狀態,需預備冷凍槽,槽內放碎冰塊與食鹽,混合均勻,可冷至-15℃。設備儀器如圖Ⅶ-16,安瓿管放入冷凍槽中的枯燥瓶內。

凤凰彩票网抽氣一般若在30分鐘內能到達93.3Pa(0.7mmHg)真空度時,則枯燥物不致熔化,今后再繼續抽氣,幾小時內,肉眼可調查到被枯燥物已趨枯燥,一般抽到真空度26.7Pa(0.2mmHg),堅持壓力6—8小時即可。

(6)封口抽真空枯燥后,取出安瓿管,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管(圖Ⅶ-17)繼續抽氣,約10分鐘即可到達26.7Pa(0.2mmHg)。于真空狀態下,以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中心進行封口。封口今后,保存于冰箱或室溫暗處。

此法為菌種保藏辦法中最有用的辦法之一,對一般生生機強的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用,即便對一些很難保存的致病菌,如腦膜炎球菌與淋病球菌等亦能保存。適用于菌種長時刻保存,一般可保存數年至十余年,但設備和操作都比較復雜。


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