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食用菌滅菌鍋爐液氮冷凍保藏法

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食用菌滅菌鍋爐液氮冷凍保藏法

發布日期:2017-07-27 00:00 來源:http://escortluton.com 點擊:

(1)準備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管,食用菌滅菌鍋爐要求能耐受溫度突然變化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管,安瓿管的大小通常使用75×10mm的,或能容1.2mm液體的。

(2)加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時,則將空安瓿管塞上棉塞,1.05kg/cm2,121.3℃滅菌15分鐘:若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10%的甘油蒸餾水溶液或10%二甲亞砜蒸餾水溶液,加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限,而后再用1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌15分鐘。

(3)接入菌種將菌種用10%的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液,裝入已滅菌的安瓿管;霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器,從平板內切取菌落圓塊,放入含有保護劑的安瓿管內,然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。

凤凰彩票网(4)凍結再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍,則在細胞內會形成冰的結晶,因而降低存活率。

(5)保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器(圖Ⅶ-14)的小圓筒內,然后再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃,液態氮內為-196℃。

(6)恢復培養保藏的菌種需要用時,將安瓿管取出,立即放入38—40℃的水浴中進行急劇解凍,直到全部融化為止。再打開安瓿管,將內容物移入適宜的培養基上培養。

凤凰彩票网此法除適宜于一般微生物的保藏外,對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏,而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。

食用菌滅菌鍋爐

冷凍干燥保藏法

(1)準備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造,形狀可用長頸球形底的,亦稱淚滴型安瓿管(圖Ⅶ-15),大小要求外徑6—7.5mm,長105mm,球部直徑9—11mm,壁厚0.6—1.2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞,1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘,備用。

(2)準備菌種,用冷凍干燥法保藏的菌種,其保藏期可達數年至十數年,為了在許多年后不出差錯,故所用菌種要特別注意其純度,即不能有雜菌污染,然后在最適培養基中用最適溫度培養,使培養出良好的培養物。細菌和酵母的菌齡要求超過對數生長期,若用對數生長期的菌種進行保藏,其存活率反而降低。一般,細菌要求24—48小時的培養物;酵母需培養3天;形成孢子的微生物則宜保存孢子;放線菌與絲狀真菌則培養7—10天。

凤凰彩票网(3)制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例,用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中,制成濃菌液,每支安瓿管分裝0.2ml。

(4)冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售,價值昂貴,此處介紹的是簡易方法與裝置,可達到同樣的目的。

凤凰彩票网將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍,無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精液或干冰丙酮液,溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑,只需冷凍4—5分鐘,即可使懸液結冰。

(5)真空干燥為在真空干燥時使樣品保持凍結狀態,需準備冷凍槽,槽內放碎冰塊與食鹽,混合均勻,可冷至-15℃。裝置儀器如圖Ⅶ-16,安瓿管放入冷凍槽中的干燥瓶內。

抽氣一般若在30分鐘內能達到93.3Pa(0.7mmHg)真空度時,則干燥物不致熔化,以后再繼續抽氣,幾小時內,肉眼可觀察到被干燥物已趨干燥,一般抽到真空度26.7Pa(0.2mmHg),保持壓力6—8小時即可。

(6)封口抽真空干燥后,取出安瓿管,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管(圖Ⅶ-17)繼續抽氣,約10分鐘即可達到26.7Pa(0.2mmHg)。于真空狀態下,以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口。封口以后,保存于冰箱或室溫暗處。

此法為菌種保藏方法中最有效的方法之一,對一般生活力強的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用,即使對一些很難保存的致病菌,如腦膜炎球菌與淋病球菌等亦能保存。適用于菌種長期保存,一般可保存數年至十余年,但設備和操作都比較復雜。


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